表達(dá)NDV HN和IBDV VP2融合蛋白的重組減毒沙門菌的構(gòu)建及其生物學(xué)特性分析
摘要：為構(gòu)建表達(dá)雞新城疫病毒(NDV)HN和傳染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2融合蛋白的重組減毒沙門菌,并分析其生物學(xué)特性。本研究擴(kuò)增了NDVHN和IBDVVP2主要抗原基因片段,通過(guò)重疊延伸PCR擴(kuò)增獲得HN-VP2融合基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒pYA-HN-VP2,將該重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化至減毒鼠傷寒沙門菌SL1344ΔcrpΔcyaΔasd中,獲得表達(dá)HN-VP2融合蛋白的減毒重組菌SL1344ΔcrpΔcyaΔasd(pYA-HN-VP2),并分析其生化特性、遺傳穩(wěn)定性和毒力等生物學(xué)特性。Westernblot結(jié)果顯示,重組減毒沙門菌可分泌表達(dá)HN-VP2融合蛋白,大小為84ku,且該融合蛋白分別能與相應(yīng)特異性陽(yáng)性血清發(fā)生反應(yīng);生物學(xué)特性結(jié)果顯示,重組菌株失去了利用麥芽糖、山梨醇及乳糖等碳源的能力,其生長(zhǎng)速度顯著慢于野生菌株SL1344;毒力較野生菌株至少下降5個(gè)對(duì)數(shù)單位,且能夠穩(wěn)定遺傳重組質(zhì)粒pYA-HN-VP2。本研究為雞新城疫-傳染性法氏囊病-沙門菌病的三聯(lián)口服疫苗研制奠定重要基礎(chǔ)。
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