摘要：目的探索大鼠絲裂原活化蛋白激酶激酶7（mitogen activated protein kinase kinase7，MKK7）基因在體外細胞實驗中的表達調控規(guī)律。方法利用分子生物學方法將大鼠MKK7全長cDNA序列克隆到編碼增強型綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein，eGFP）和Flag（編碼DYKDDDDK親水性多肽）標簽的真核表達載體Pvpl6-AD中，構建出Pvpl6-Flag-MKK7-eGFP重組質粒。通過酶切及DNA測序的方法驗證重組質粒序列的正確性后，采用脂質體介導方法將重組質粒瞬時轉染COS7細胞，通過熒光顯微鏡觀察質粒與脂質體不同比例情況下以及確定最高轉染效率的比例后不同時間段大鼠MKK7基因表達情況。結果成功構建重組真核表達質粒Pvpl6-Flag-MKK7-eGFP。酶切及DNA測序方法確定重組質粒中大鼠MKK7序列與原序列一致。重組質粒與脂質體的比例為1：3時，重組質粒在COS7細胞中的轉染效率最高，差異具有統(tǒng)計學意義（P〈0．05）。質粒轉染后72h時，COS7細胞中MKK7蛋白表達量相對最高，差異具有統(tǒng)計學意義（P〈0．05）。結論大鼠MKK7重組真核表達載體的構建及其在COS7細胞中轉染效率的探索工作為研究大鼠MKK7基因在體外引起細胞分化、增殖、凋亡、炎癥反應和應激反應等一系列生物學改變奠定基礎。