摘要：目的:構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP-N1/IgE Fc,為建立一種以IgE分子Fc段為佐劑的高效安全的抗腫瘤免疫治療奠定基礎(chǔ)。方法:分離急性蕁麻疹病人的外周靜脈血淋巴細(xì)胞,Trizol一步法提取總RNA,甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳證實(shí)所提RNA沒(méi)有明顯降解后,在AMV逆轉(zhuǎn)錄酶作用下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),Pfu DNA聚合酶作用下進(jìn)行聚合反應(yīng)得到目的片斷。提取質(zhì)粒pEGFP-N1,將pEGFP-N1及IgE Fc基因的cDNA分別用限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ、BamHⅠ雙酶切,電泳分離,純化回收試劑盒回收IgE Fc基因cDN斷和質(zhì)粒pEGFPN1,T4DNA連接酶連接兩片斷,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞Top10,小量提取質(zhì)粒,限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ、BamHⅠ初步酶切鑒定,重組質(zhì)粒送大連寶生物工程有限公司測(cè)序。結(jié)果:酶切及測(cè)序結(jié)果表明pEGFP-N1/IgE Fc真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建成功。結(jié)論:成功構(gòu)建重組質(zhì)粒p EGFP-N1/IgE Fc,為進(jìn)一步研究其功能及探索新的抗腫瘤方向奠定了基礎(chǔ)。