摘要：目的:探討人巨細(xì)胞病毒(HCMV)US31蛋白及其多克隆抗體的制備及鑒定方法。方法:HCMV US31基因經(jīng)原核密碼子優(yōu)化后進(jìn)行全基因合成,克隆至pET21a(+)原核表達(dá)載體,構(gòu)建pET21a(+)/HCMVUS31重組質(zhì)粒,測(cè)序鑒定;將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá),Ni-NTA親和層析法純化US31蛋白,免疫新西蘭兔制備多克隆抗體,ELISA、Western blot及免疫熒光方法檢測(cè)抗體效價(jià)和特異性。結(jié)果:在大腸桿菌中誘導(dǎo)出高表達(dá)的HCMV US31融合蛋白,經(jīng)Ni-NTA親和純化后獲得高純度的目的蛋白;免疫新西蘭兔誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性的IgG抗體,效價(jià)為1:49600;經(jīng)ELISA、Westernblot以及免疫熒光均證實(shí)制備的特異性抗體可識(shí)別細(xì)胞中表達(dá)的US31蛋白。結(jié)論:成功制備了HCMV US31蛋白及特異性抗體,為進(jìn)一步研究US31蛋白的生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。