肺炎克雷伯氏菌漆酶基因的克隆及其在畢赤酵母中的高效表達
作者：王建玲; 桂爽; 付禹; 張妤彤; 鄭東; 路福平; 劉逸寒 工業(yè)發(fā)酵微生物教育部重點實驗室; 天津市工業(yè)微生物重點實驗室; 工業(yè)酶國家工程實驗室; 天津科技大學(xué)生物工程學(xué)院; 天津300457
摘要：以肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)基因組為模板,通過PCR擴增得到其漆酶基因lac;基于畢赤酵母密碼子偏愛性優(yōu)化后,得到新型漆酶基因lacm;將其與大腸桿菌-畢赤酵母(E.coli-P.pastoris)穿梭表達載體pPIC9K連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒pPIC9K-lacm;將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)化畢赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,實現(xiàn)該漆酶的胞外分泌表達,發(fā)酵液中重組漆酶(rLACM)活力達0.37U/mL.經(jīng)對rLACM酶學(xué)性質(zhì)分析表明:rLACM的最適溫度為70℃,最適pH為8.0,在30~70℃、pH5.0~9.0活力穩(wěn)定.
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