摘要：【目的】明確轉(zhuǎn)GbVe1基因棉花的插入位點(diǎn)序列特征。【方法】Southern雜交篩選低拷貝基因插入的轉(zhuǎn)基因棉花株系,以hiTAIL-PCR(Polymerase chain reaction)獲取其T-DNA側(cè)翼序列,然后根據(jù)獲得的T-DNA側(cè)翼序列設(shè)計特異PCR引物,驗證插入位點(diǎn)的準(zhǔn)確性。【結(jié)果】Southern雜交候選了T-DNA低拷貝插入的3個轉(zhuǎn)基因棉花株系,hiTAIL-PCR分離到RB端側(cè)翼序列(119~1 018 bp)、LB端側(cè)翼序列(243~516 bp);側(cè)翼序列的AT堿基含量在63%以上。轉(zhuǎn)基因株系7/100826-152和12/100826-393插入位點(diǎn)都位于Gohir.D01G157600.1內(nèi)含子上。轉(zhuǎn)基因株系1/w-ch14插入位點(diǎn)分別位于Gohir.D01G157600.1內(nèi)含子和A12染色體的基因間隔區(qū)中。T-DNA在Gohir.D01G157600.1內(nèi)含子的插入事件造成了21 bp堿基的基因組序列缺失。T-DNA到側(cè)翼序列的PCR產(chǎn)物證明Gohir.D01G157600.1上的插入位點(diǎn)真實(shí)可靠。【結(jié)論】hiTAIL-PCR獲取了轉(zhuǎn)GbVe1基因棉花的T-DNA側(cè)翼序列,提供了T-DNA插入位點(diǎn)位于Gohir.D01G157600.1基因內(nèi)含子的特異性檢測引物。