摘要：為了研究鵝α干擾素(goIFN-α)基因原核表達(dá)產(chǎn)物的反應(yīng)原性并進(jìn)行g(shù)oIFN-α抗血清的制備,試驗首先根據(jù)大腸桿菌偏愛密碼子對goIFN-α基因進(jìn)行優(yōu)化,隨后采用PCR方法擴(kuò)增goIFN-α編碼序列并進(jìn)行同源性分析。將goIFN-α片段與表達(dá)載體pET-28a連接,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-goIFN-α,然后將重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后進(jìn)行SDS-PAGE和Western-blot檢測。通過切膠回收的方法回收目的條帶,將碾碎的蛋白膠與PBS混合后注入小鼠體內(nèi),15 d后回收血清進(jìn)行Western-blot檢測。結(jié)果表明:試驗成功擴(kuò)增出goIFN-α基因;與多種IFN-α基因序列進(jìn)行比較,goIFN-α基因氨基酸序列的同源性為92.5%~98.1%;隨后成功構(gòu)建出重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-goIFN-α,并將其轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中,重組蛋白goIFN-α的分子質(zhì)量約為18 ku,具有良好的反應(yīng)原性;回收血清進(jìn)行Western-blot檢測,鼠抗goIFN-α血清制備成功。說明重組goIFN-α蛋白能夠在大腸桿菌中表達(dá),大小符合預(yù)期且具有良好的反應(yīng)原性,并成功制備出鼠抗goIFN-α血清。