摘要：從中蔬四號(hào)番茄品種中克隆能在番茄葉片中高效轉(zhuǎn)錄的SlU3啟動(dòng)子,為今后利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)進(jìn)行分子育種奠定了基礎(chǔ)。采用2輪PCR的方法,第1輪PCR從中蔬四號(hào)番茄品種中克隆了3種SlU3啟動(dòng)子,再采用Transfer PCR方法分別對(duì)3個(gè)啟動(dòng)子進(jìn)行截短,共得到6個(gè)不同長(zhǎng)度的啟動(dòng)子,并分別構(gòu)建6個(gè)截短的SlU3啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)GUS融合植物表達(dá)載體,利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法分別轉(zhuǎn)染番茄葉片。運(yùn)用DNAMAN軟件對(duì)已克隆的SlU3和擬南芥AtU3啟動(dòng)子序列具有轉(zhuǎn)錄功能的必要元件進(jìn)行序列分析;經(jīng)過(guò)2輪PCR,首先從中蔬四號(hào)番茄品種中克隆了3種SlU3-1P、SlU3-3P、SlU3-4P啟動(dòng)子,其長(zhǎng)度分別是1 156,1 114,1 147 bp,再采用Transfer PCR方法分別對(duì)3個(gè)啟動(dòng)子進(jìn)行截短,共得到6個(gè)不同長(zhǎng)度的啟動(dòng)子,其長(zhǎng)度依次是489,318,450,248,457,248 bp,并分別構(gòu)建6個(gè)截短SlU3啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)GUS融合植物表達(dá)載體,啟動(dòng)子序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn),番茄U3啟動(dòng)子與擬南芥U3啟動(dòng)子一樣,也含有比較保守的2個(gè)元件,USE和TATA框,2個(gè)元件之間的位置比較固定。利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法分別轉(zhuǎn)染番茄葉片,結(jié)果顯示,成功侵染后的番茄葉片均被染成藍(lán)色,表明已克隆的6種不同截短番茄SlU3啟動(dòng)子均具有轉(zhuǎn)錄活性。成功克隆了6種在番茄葉片中高效轉(zhuǎn)錄的SlU3啟動(dòng)子,為構(gòu)建番茄CRISPR/Cas9基因編輯載體提供更多高效的內(nèi)源啟動(dòng)子。