摘要：目的在大腸桿菌中表達具有生物活性的人膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（glial cell linederived neurotrophic factor, GDNF）蛋白。方法從人膠質(zhì)瘤組織中提取總RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription PCR，RT—PCR）方法擴增出GDNFDN段，并將經(jīng)雙酶切后的GDNF基因片段直接與表達載體pET28a＋連接，構(gòu)建重組表達載體pET28a＋GDNF，再將其轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21中進行異丙基-β—D一硫代半乳糖苷誘導(dǎo)表達；采用分子篩層析法對表達產(chǎn)物進行純化；用十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）對其純度進行鑒定。結(jié)果酶切和測序證實，PCR擴增出GDNF基因片段為GDNF成熟肽編碼序列；表達產(chǎn)物的SDS—PAGE顯示，相對分子質(zhì)量16000處有一新增蛋白帶。結(jié)論本研究所構(gòu)建的原核表達系統(tǒng)可表達人GDNF。