人血漿N-糖鏈超高效液相色譜檢測方法的優(yōu)化
作者：王婷; 陳海松; 李旺; Josef; Voglmeir; 劉麗 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院; 江蘇南京210095
摘要：優(yōu)化了超高效液相色譜(UPLC)檢測N-糖鏈的方法,并用于人血漿樣品檢測。人血漿樣品直接加熱后使用N-糖酰胺酶F消化釋放糖鏈,N-糖鏈經(jīng)2-氨基苯甲酸胺(2-AB)標(biāo)記反應(yīng)4h,采用60%的乙腈進樣濃度進行色譜分離,共得到19個色譜峰,對各峰使用離線基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOFMS)檢測得到N-糖鏈結(jié)構(gòu)40種,其中含具有末端唾液酸修飾的N-糖鏈27種。結(jié)合液相色譜、唾液酸酶消化和質(zhì)譜結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn):部分N-糖鏈末端唾液酸無論是在三氯乙酸(TCA)沉淀還是氯仿/甲醇沉淀的前處理過程中都發(fā)生了解離;80%的乙腈進樣濃度會導(dǎo)致大部分含唾液酸N-糖鏈沉淀而影響色譜檢測;而2-AB標(biāo)記4h反應(yīng)時間能夠在提高檢測靈敏度的同時減少唾液酸的損失。使用該方法僅需2.5μL血漿樣品即可進行檢測,日內(nèi)和日間的重復(fù)性試驗結(jié)果均無顯著性差異。研究結(jié)果表明優(yōu)化后的UPLC法適用于富含唾液酸的人血漿樣品的檢測.
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