摘要：比較三種常用的CRISPR/Cas9基因敲除檢測變異方法,從準(zhǔn)確性、耗時(shí)、成本和應(yīng)用限制等方面進(jìn)行評估。采用T7核酸內(nèi)切酶I、限制性內(nèi)切酶和非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳法分別對利用CRISPR/Cas9方法敲除的fibinb和ngs基因的50尾斑馬魚(Daniorerio)突變純合個(gè)體和突變雜合個(gè)體進(jìn)行檢測,用野生型個(gè)體作對照;同時(shí)用非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳對CRISPR/Cas9方法敲除的ogn和ddb1基因的突變雜合個(gè)體進(jìn)行了檢測。結(jié)果表明:三種方法均能夠區(qū)分突變雜合個(gè)體,其中T7核酸內(nèi)切酶I檢測法耗時(shí)最短,但該方法不能用于鑒定突變純合個(gè)體;限制性內(nèi)切酶檢測法能夠用于鑒定純合個(gè)體,但需要有特異性的識別位點(diǎn);非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳法能夠區(qū)分純合和雜合個(gè)體,對序列無依賴性,能夠檢測出序列中存在的所有變異。成本上,非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳法最經(jīng)濟(jì);限制性內(nèi)切酶的價(jià)格存在較大的差異,因此檢測成本依賴于酶的價(jià)格。三種檢測方法各有優(yōu)缺點(diǎn),在應(yīng)用實(shí)踐中可根據(jù)試驗(yàn)需要選擇合適的方法。