高滴度慢病毒制備及其感染人原代T細(xì)胞的條件優(yōu)化
作者：歐陽寒梅; 羅丹; 王欣; 劉雯; 游露; 代正群; 楊艷; 葉鑫宇; 鄒強(qiáng) 成都醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院; 成都610500; 成都醫(yī)學(xué)院科研實(shí)驗(yàn)中心; 成都610500
摘要：目的為提高T細(xì)胞的感染率,探究高滴度慢病毒的制備、保存及感染T細(xì)胞的較佳條件。方法本研究使用二代和三代慢病毒包裝系統(tǒng)搭配二代和三代慢病毒載體、相同載體不同啟動(dòng)子制備慢病毒濃縮后,用不同保存條件的慢病毒感染Jurkat細(xì)胞和不同活化程度的T細(xì)胞,然后用流式細(xì)胞儀檢測(cè),進(jìn)一步計(jì)算出病毒滴度和感染率。結(jié)果三代慢病毒包裝系統(tǒng)搭配三代慢病毒載體pLVX-EGFP包裝慢病毒滴度較高;EF-1a啟動(dòng)子的載體優(yōu)于CMV啟動(dòng)子的載體;病毒在4℃存儲(chǔ)1d和在-80℃凍融1次滴度下降低于10%,在4℃存儲(chǔ)2d以上和在-80℃凍融兩次以上滴度下降超過35%;T細(xì)胞活化后才能被慢病毒感染;T細(xì)胞活化后較佳感染時(shí)相點(diǎn)為活化后24h。結(jié)論EF-1a啟動(dòng)子的載體優(yōu)于CMV啟動(dòng)子的載體;病毒不要反復(fù)凍融;T細(xì)胞活化后24h轉(zhuǎn)導(dǎo)慢病毒轉(zhuǎn)到效率較高。
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